FCS (DCF) - Dissertações de Mestrado
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- Glutationa: envolvimento em defesa antioxidante, regulação de morte celular programada e destoxificação de drogasPublication . Neto, Ana Soares da Silva Rodrigues; Castro, AnabelaA glutationa (GSH) está profusamente distribuída em tecidos animais, vegetais e em microorganismos. Encontra-se presente em elevadas concentrações intracelulares (0.1-10 mM) e é consequentemente o tiol mais prevalente e o mais abundante péptido de baixo peso molecular. A GSH foi adaptada por processos evolutivos para realizar uma gama diversa de funções. Por exemplo, a glutationa mantém um adequado potencial de oxidação-redução nas células. A glutationa interfere na catálise, metabolismo e transporte; participa em reacções que envolvem a síntese de proteínas e ácidos nucleicos e também em reacções de metabolização de peróxidos e de inactivação de radicais livres. É frequente a formação de conjugados de glutationa com uma grande variedade de compostos de origem endógena e exógena e a glutationa é também um co-factor para diversas enzimas. A GSH é sintetizada intracelularmente e é exportada das células; a sua degradação é iniciada por y-glutamil transpeptidase, uma enzima conjugada à superfície externa de certas membranas celulares. Alterações no metabolismo de glutationa em associação com um aumento do stress oxidativo tem sido relacionado com a patogenicidade de diversas doenças. Contudo, é ainda desconhecido se estratégias que tenham como objectivo restaurar a concentração de glutationa e a homeostasia são eficientes na melhoria ou modificação destes estados. Nesta revisão é focado o papel patogénico de alterações no metabolismo de glutationa em diversas doenças. A apoptose representa um mecanismo fisiológico conservado de morte celular programada, que é essencial ao normal desenvolvimento e à homeostasia dos tecidos em todos os organismos, afirmando-se assim o papel crítico da GSH como modelador-chave das funções celulares. Desta forma, uma alteração da GSH celular para glutationa oxidada (GSSG) leva a que a alteração do balanço redox favoreça a permanência de espécies reactivas de oxigénio. Com isto a glutationa oxidada constitui um marco importante no destino da célula. Esta revisão aborda a descrição das diferentes vias apoptóticos, a compartimentalização celular de GSH e as proteínas redox de sinalização apoptótica assim como o papel dos mecanismos redox nas fases de iniciação e execução da apoptose. Glutathione (GSH) is widely distributed in animal tissues, plants, and microorganisms. It is present in high (0.1-10 mM) levels and is thus both the most prevalent cellular thiol and the most abundant low molecular weight peptide. GSH has been adapted through evolution to perform many diverse functions. Glutathione maintains proper oxidation-reduction potential inside cells. Redox affects the oxidation state of sulfur in enzymes, and thus affects the rates of biochemical reactions in cells. GSH functions in catalysis, metabolism, and transport; it participates in reactions involving the synthesis of proteins and nucleic acids and in those that scavenges peroxides and oxidizing free radicals. GSH forms conjugates with a variety of compounds of endogenous and exogenous origin and is a cofactor for various enzymes. GSH is synthesized intracellularly and is exported from cells; its breakdown is initiated by y-glutamyl transpeptidase, an enzyme attached to the external surface of certain cell membranes. Altered glutathione metabolism in association with increased oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of many diseases. However, whether strategies aimed at restoring glutathione concentration and homeostasis are effective in ameliorating or modifying the natural history of these states is unknown. In this review we focus the pathogenic role for altered glutathione metabolism in several diseases. Apoptosis represents a physiologically conserved mechanism of cell death that is pivotal in normal development and tissue homeostasis in all organisms. As a key modulator of cell functions, GSH, plays a critical role. Thus, a shift in the cellular GSH to oxidized glutathione (GSSG) redox balance in favour of the oxidized species, GSSG, constitutes an important signal that could decide the fate of a cell. This review focus general description of cellular apoptotic pathways, cellular compartmentation of GSH and redox proteins to apoptotic signalling and the role of redox mechanisms in the initiation and execution phases of apoptosis.
- Estudo dos efeitos de paracetamol em parâmetros reprodutivos e comportamentais de Daphnia magnaPublication . Rodrigues, Fernanda Margarida Silva Cardoso; Nunes, BrunoNas últimas décadas a contaminação de origem antropogénica dos ecossistemas aquáticos tem vindo sucessivamente a aumentar. Em consequência, fármacos e seus resíduos são frequentemente detectados em ecossistemas aquáticos. A concentração crescente de resíduos de fármacos em ecossistemas aquáticos tem vindo a reunir cada vez mais interesse, quer por estar a sofrer um aumento em quantidade e variedade, quer pela toxicidade que pode provocar nos organismos aquáticos, criando a necessidade da avaliação do seu efeito nestes ecossistemas. Daphnia magna é um organismo teste amplamente utilizado em Ecotoxicologia na avaliação da toxicidade de substâncias químicas, tendo sido a espécie escolhida para a realização deste estudo. Assim, e em virtude de uma ausência de estudos em número suficiente para caracterizar a resposta ecotoxicológica que deriva da exposição ao anti-inflamatório paracetamol por via ambiental, foi estabelecido como objectivo do presente estudo avaliar os efeitos deste composto sobre juvenis do organismo padrão Daphnia magna. Para este efeito, realizaram-se testes padronizados de toxicidade aguda e crónica, com concentrações conhecidas do fármaco. Os resultados obtidos, sugerem que o paracetamol tem um efeito de toxicidade aguda sobre o crustáceo com valores de LC50 às 24 horas de 0,328 mg/l (+/- 0,104 mg/l). Sugerem também um efeito deletério na alimentação e reprodução de Daphnia magna, pois verificou-se um decréscimo significativo da taxa reprodutiva em todas as concentrações utilizadas, e também um decréscimo na taxa de alimentação na mais alta concentração utilizada. In few decades anthropogenic contamination of aquatic ecosystems has been significantly increased. Consequently, drugs and their residues are commonly found in aquatic ecosystems. The increasing concentration and variety of pharmaceutical residues in aquatic ecosystems has increased the scientific interest, either due to the increase of these residues in aquatic ecosystems, but also as a consequence of the potential toxicity that they may cause in aquatic organisms. This enhances the need to evaluate the effect of these compounds in aquatic ecosystems. Daphnia magna is commonly used as test organism in Ecotoxicology, for the assessment of the toxicity of chemicals, and was the species chosen for the present study. Therefore, and due to a lack of a suitable number of studies characterizing the ecotoxicological response derived from the environmental exposure to the anti-inflammatory drug paracetamol, our primary objective was to evaluate the effects of this compound on Daphnia magna juveniles. To attain this purpose, were observed the acute and chronic toxicity elicited by the mentioned compounds, following exposures to known concentrations of the drug. The obtained results suggested that paracetamol evidenced an acute toxic effect on the crustacean with LC50 values at 24 hours of 0.328 mg/l. They also suggest a deleterious effect on feeding and reproduction behaviors of Daphnia magna, as there was a significant decrease in reproductive rate at all concentrations used, and also a decrease in the feeding rate for the highest tested concentration.
- Factores genéticos envolvidos na doença de AlzheimerPublication . Prado, Denise de Morais Duarte; Cardoso, Inês Lopes“Factores Genéticos envolvidos na Doença de Alzheimer” é um trabalho de pesquisa e revisão bibliográfica realizado no segundo semestre de 2010. Em “Factores Genéticos envolvidos na Doença de Alzheimer” pretende-se realizar pesquisas em vários tópicos, entre estes, a definição da patologia, factores genéticos envolvidos, tratamento, factor nutricional, perspectivas futuras como também o papel do farmacêutico perante a equipa multidisciplinar e o doente. O capítulo 1 faz uma introdução ao que é a doença, alguns dados segundo o Relatório Mundial de DA de 2009. No capítulo 2 são descritos os Tipos de DA assim como factores genéticos associados. Já no capítulo 3 faz-se referência em particular ao papel da ApoE na DA, e nos capítulos seguintes (4 e 5) foi feita uma abordagem ao tratamento, à função do farmacêutico comunitário e sua actuação no SNS. Por fim no sexto e último capítulo faz-se a discussão de pesquisas futuras com o objectivo de uma melhor qualidade de vida para o doente, da escolha do tipo de tratamento farmacológico ou não, da inserção do farmacêutico na equipa multidisciplinar na Unidade Básica de Saúde, visto que estes pacientes necessitam de cuidadores e tratamentos especializados. “Genetic factors involved in Alzheimer’s disease" is a work of research and literature review conducted in the second half of 2010. This work intends to conduct research on various topics like description of pathology, genetic factors, treatment, nutritional factors, future prospects, as well as the role of the pharmacist in the multidisciplinary team and its role facing the patient. Chapter 1 provides an introduction to what the disease is, according to some data of DA World Report 2009. Chapter 2 describes types of AD as well as genetic factors involved. In chapter 3, reference is made in particular to the role of ApoE in AD, and the following chapters (4 and 5) an approach is made concerning the treatment, the role of community pharmacist and his performance in the NHS. Finally the sixth and final chapter contains the discussion about future research with the aim of a better quality of life for the patient, about the type of treatment if pharmacological or not, about the inclusion of a pharmacist in the multidisciplinary team of the Basic Health Unit, due to the specialized treatment and caregivers required by these patients.
- Desenvolvimento de um sistema terapêutico com bacteriófagos para administração por via inalatória, com recurso a nanoencapsulação, como modelo para tratamento de pneumonia bacterianaPublication . Azevedo, André Filipe Oliveira Mendes de; Balcão, Victor M.; Matos, CarlaA emergência de estirpes bacterianas resistentes aos antibióticos e a fraca penetração dos antibióticos em biofilmes bacterianos põe em ênfase a necessidade de alternativas seguras e eficazes para o tratamento antimicrobiano. A aplicação de bacteriófagos (ou fagos) estritamente líticos tem sido proposta como uma alternativa (ou complemento) aos antibióticos convencionais, permitindo a libertação dos predadores naturais das bactérias directamente no local de infecção. Provavelmente, a maior vantagem de terapias à base de fagos reside no facto dos fagos se replicarem directamente no local de infecção, tornando-se profusamente disponíveis onde são mais necessários. Quando comparados aos antibióticos, os fagos apresentam diversas vantagens relevantes: (i) concentrações permanentemente elevadas no local de infecção, aumentando na presença de bactérias (viáveis), sendo apenas eliminados após erradicação; (ii) compatibilidade total com os antibióticos; (iii) específicos contra bactérias alvo; (iv) maior penetração em biofilmes bacterianos, através da indução para produção de enzimas que hidrolizam a matriz polimérica dos biofilmes; e (v) enquanto as bactéria podem desenvolver resistência aos fagos, o isolamento e a produção em larga escala de novos fagos é bastante mais simples e económico do que desenvolver novos antibióticos. Emulsões água em óleo em água (A/O/A) são exemplos de emulsões em que pequenas gotas de água se encontram dispersas em partículas maiores de óleo que por sua vez se encontram dispersas num fase aquosa continua. Devido à sua estrutura interna compartimentalizada, estas emulsões apresentam vantagens para encapsulação em relação a emulsões simples O/A, como a capacidade para transportar moléculas tanto polar como não polar, e permitem um melhor controlo na libertação de moléculas terapêuticas. Neste trabalho de pesquisa, foi investigado o potencial do encapsulamento de um fago (phi-PVP-SE1) de espectro alargado capaz de infectar Salmonella e E. coli. A caracterização fisico-quimica da formulção encapsuladora dos fagos incluiu a determinação do tamanho de partícula, distribuição de partícula e carga das partículas através da análise do Potêncial Zeta, morfologia de superfície via SEM, eficiência de encapsulação e análise térmica via DSC. A actividade antimicrobiana das nanoemulsões produzidas foi também testada in vitro. The emergence of antibiotic-resistant bacterial strains and the week penetration of antibiotics in bacterial biofilms put an emphasis in the need for safe and effective alternatives for antimicrobial treatments. The application of strictly lytic bacteriophages (or phages) has been proposed as an alternative (or complement) to conventional antibiotics, allowing release of the natural predators of bacteria directly to the site of infection. Probably, the major advantage of phage-based therapy lies in the fact that phages replicate directly in the site of infection, becoming profusely available where they are most needed. When compared to antibiotics, phages present many relevant advantages: (i) permanently high concentrations at the infection site, increasing in the presence of (viable) bacterial host, with elimination occurring only after eradication of the later; (ii) total compatibility with antibiotics; (iii) specificity against target-bacteria; (iv) higher penetration in bacterial biofilms, by inducing production of enzymes that hydrolyze biofilm polymeric matrix; and (v) while bacteria can develop resistance to phages, isolation and large-scale production of new lytic phages is much simpler and economical than developing a new antibiotic. Water-in-oil-in-water (W/O/W) emulsions are examples of emulsions, in which dispersions of small water droplets within larger oil particles are themselves dispersed in a continuous aqueous phase. Due to their compartimentalized internal structure, this emulsions present advantages over simple O/W emulsions for encapsulation, such as the ability to carry both polar and non-polar molecules, and a better control over releasing of therapeutic molecules. In the present research work, the potential of encapsulating a broad lytic spectrum phage (phi-PVP-SE1) able to infect enteric Salmonella and E. coli has been investigated. Physicochemical characterization of the optimized phage-encasing particle formulations encompassed determination of particle size, size distribution and particle charge, via Zeta potential analysis, surface morphology via SEM, encapsulation efficiency, and thermal analysis via DSC. The antimicrobial activity of the emulsions produced was also assessed in vitro.
- Estudo do efeito protector do própolis de origem portuguesa na danificação oxidativa em eritrócitos humanosPublication . Baltazar, Ana Filipa Marques Almeida; Carvalho, MárciaO própolis é uma mistura complexa de substâncias resinosas de ampla utilidade para as abelhas e para o homem. O desenvolvimento crescente de novas técnicas analíticas tem permitido um considerável avanço na química dos produtos naturais, assim como na elucidação de suas estruturas moleculares. A composição química do própolis é complexa e está relacionada com a flora da região em que foi originada e a época da colheita. As suas actividades farmacológicas têm sido atribuídas aos compostos fenólicos, entre eles flavonóides e ácidos fenólicos, cujos teores têm sido propostos como parâmetros para o controle da qualidade. Devido às inúmeras propriedades benéficas do própolis, o seu uso comercial em produtos farmacêuticos, cosméticos e de higiene pessoal na forma de extractos líquidos é vasto. O presente trabalho teve como objectivo avaliar a actividade antioxidante do própolis de origem portuguesa em sistemas biológicos, utilizando como modelo celular in vitro o eritrócito humano. Pretendeu-se assim estudar o papel protector de extractos metanólicos obtidos do própolis proveniente de duas regiões portuguesas distintas, Bornes (Nordeste de Portugal) e Fundão (Centro de Portugal), relativamente aos danos oxidativos induzidos por radicais livres em eritrócitos humanos. O 2,2´-azo-bis(2-amidinopropano) (AAPH) é um sistema gerador de radicais livres peroxilo no meio extracelular que atacam a membrana eritrocitária causando várias alterações oxidativas, as quais foram avaliadas neste estudo pela libertação de hemoglobina (hemólise) e pela peroxidação dos lípidos da membrana dos eritrócitos. Os resultados obtidos neste estudo mostram que ambos os extractos protegem significativamente a membrana dos eritrócitos da hemólise induzida pelo AAPH, de um modo dependente da concentração de extracto e do tempo de incubação. No entanto, o extracto de própolis de Bornes apresentou um efeito anti-hemolítico superior ao do própolis do Fundão, sendo o valor de IC50 determinado para o extracto de Bornes após três horas de incubação de 6,3 ± 0,7 μg/mL e de 10,4 ± 2,7 μg/mL para o do Fundão. Dada a reconhecida actividade antioxidante do ácido ascórbico, a actividade anti-hemolítica dos extractos de própolis foi comparada com a do ácido ascórbico (IC50 de 31,0 ± 5,6 μg/mL), tendo-se verificado um efeito antioxidante significativamente superior para os extractos de própolis. A extensão da peroxidação lipídica foi avaliada pela formação de malonildialdeído (MDA), que é conhecido como um produto carbonilo do dano lipídico oxidativo. Sob a acção oxidativa do AAPH, os eritrócitos humanos tratados com os extractos de própolis diminuíram significativamente a acção do AAPH de um modo dependente da concentração de extracto. Os valores de IC50 para os extractos do própolis de Bornes e do Fundão foram respectivamente de 8,1 ± 2,3 e 9,7 ± 2,3 μg/mL. Os resultados deste estudo mostram que o própolis de origem portuguesa apresenta um considerável potencial antioxidante e sequestrador de radicais livres, o que sugere a sua eventual aplicação na prevenção e/ou tratamento de diversas situações patológicas em que os radicais livres estão envolvidos. Propolis is a complex resinous bee product with great interest to bees and humans. The increasing development of new analytical techniques allowed a considerable advance in the chemistry of natural products, as well as the elucidation of their molecular structures. The chemical composition of propolis is complex and is related to the flora of the region they originated and the time of harvest. Their pharmacological activities have been attributed to phenolic compounds, including flavonoids and phenolic acids, whose contents have been proposed as parameters for quality control. Due to the numerous beneficial properties of propolis, its commercial use in pharmaceuticals and cosmetics in the form of liquid extracts is broad. In this study, the antioxidant potential of propolis samples from Bornes (Northeast) and Fundão (Centre) regions of Portugal was evaluated by their ability to inhibit the 2,2´-azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)-induced oxidative hemolysis and lipid peroxidation in human erythrocytes. Bornes and Fundão propolis strongly protected the erythrocyte membrane from hemolysis (IC50 of 6.3 ± 0.7 and 10.4 ± 2.7 μg/ml, respectively), in a time- and concentration-dependent manner. This effect was found to be significantly higher than that presented by ascorbic acid (IC50 of 31.0 ± 5.6 μg/ml). In addition, human erythrocytes treated with propolis extracts showed concentration-dependent decrease in levels of malondialdehyde, a breakdown product of lipid peroxidation. Overall, these findings support Portuguese propolis as a promising therapeutic agent in the prevention of diseases mediated by free radicals.
- Efeito do substituinte “-F” na interacção “fármaco-receptor” em BenzodiazepinasPublication . Ferraz, José António Maciel Beleza; Gomes, Lígia RebeloNeste trabalho pretendeu-se avaliar o efeito do substituinte “-F” na interacção “Fármaco-Receptor” em Benzodiazepinas (BZD). O flúor é o elemento mais electronegativo da tabela periódica, pelo que, confere à ligação C-F características únicas que influenciam parâmetros físico-químicos como distribuição de cargas, lipofilicidade e estabilidade. Estas, por sua vez, podem ter um papel importante na acção farmacológica da substância, nomeadamente, quanto à sua distribuição e ligação ao receptor proteico. Neste sentido, avaliou-se em termos quantitativos o efeito electrónico da presença de flúor em Benzodiazepinas, recorrendo-se para tal à química computacional. Executaram-se optimizações geométricas das moléculas, cálculos das suas cargas atómicas e cálculos das superfícies isoelectrónicas. Para além do efeito do substituinte fluorado, avaliou-se em simultâneo o efeito electrónico do substituinte –NO2, uma vez que, foi verificada que as BZD comerciais fluoradas também apresentam este substituinte. Verificou-se que as principais diferenças estruturais entre as Benzodiazepinas estudadas eram devidas à presença de um átomo de flúor ligado em posição C2’. Os estudos demonstraram que a ligação do carbono aromático ao flúor inverte a polaridade do primeiro elemento e que o -F, possuidor de carga – δ, interactuará com mais intensidade com moléculas carregadas positivamente. Estas diferenças condicionam a natureza das ligações intramoleculares e a ligação do ligando-receptor, no caso de formação de uma supra-estrutura do tipo fármaco-receptor. In the study the electronic effect of the substituent "-F" interaction "Drug-Receptor" in Benzodiazepines (BZD) has been evaluated. Fluorine is the most electronegative element in the periodic table, giving to the C-F bond unique characteristics that may influence physicochemical parameters as charge distribution, lipophilicity and stability. These, in turn, may have an important role in the pharmacological action of the substance, particularly in which concerns the distribution of charge within the drug and its subsequently receptor binding. Thus the quantitative evaluation of the electronic effect of the presence of fluoride in Benzodiazepines was performed by computational chemistry. The geometrical optimizations for the molecules, the calculation of their atomic charges and isopotential surfaces were made. Besides the effect of the fluorinated substituent, the effect of electronic substituent -NO2 was evaluated simultaneously, since it was verified that commercial BZD containing fluorine also have the nitro group. It was found that the main structural differences between the studied benzodiazepines were due to the presence of a fluorine atom attached in position C2'. The results have shown that the binding of aromatic carbon to fluorine reverses the polarity of the carbon atom and the -F would have and – δ type dipole allowing for a stronger interaction with residues positively charged. These differences may affect the nature of receptor-ligand binding when a supra-structure of drug-receptor type is formed.
- Associação da resistência a metais e a antibióticos em Enterococcus spp de origem animalPublication . Seco, Francisca de Araújo Coutinho Pinho Gomes Silva; Novais, CarlaNas últimas décadas, o aparecimento de bactérias multiresistentes, resultante do uso abusivo destas moléculas tem constituído um grave problema a nível mundial, sendo cada vez mais um desafio para a saúde pública em consequência da diminuição de alternativas terapêuticas disponíveis. Mais recentemente, tem-se ainda sugerido que biocidas como o cobre, o mercúrio, entre outros, largamente usados em vários nichos ecológicos, poderão contribuir para selecção e manutenção de bactérias com resistência múltipla aos antibióticos. Estudos têm demonstrado que tal fenómeno ocorre através da transferência horizontal de elementos genéticos móveis e mobilizáveis que transportam simultaneamente genes que conferem resistência a antibióticos e tolerância aos biocidas ou pela partilha de mecanismos de resistência comuns. Assim, sabendo-se que são administrados aos suínos grandes quantidades de sulfato de cobre como suplemento alimentar e que os genes que conferem resistência a este metal e ao mercúrio são facilmente dissemináveis, pretende-se com este trabalho avaliar, em isolados representativos das suiniculturas Portuguesas: a) a frequência do gene tcrB (resistência ao cobre) e merA (resistência ao mercúrio) e b) a respectiva capacidade de transferência destes genes, Incluíram-se no estudo 199 Enterococcus spp pertencentes a várias espécies, provenientes de 6 suiniculturas Portuguesas, distribuídas pelo país. O gene tcrB foi detectado em cerca de 27% dos isolados, por PCR. Destes, 59% pertenciam a E.faecium, mostrando que esta espécie tem maior capacidade de adquirir tcrB. Pelo contrário, merA não foi identificado em nenhum dos isolados. Através do método diluição em agar, adaptado das normas CLSI, tcrB+ apresentaram CMI≥16 mM, enquanto que os restantes demonstraram variações de 8 a 28 mM. Ensaios de conjugação revelaram que este gene é frequentemente transferido usando a tetraciclina e a eritromicina como moléculas de pressão selectiva. A resistência a estes antibióticos nos transconjugantes com tcrB também parece ser mais preponderante. Em suma, as suiniculturas Portuguesas são reservatórios de tcrB, frequentemente co-transferido, por conjugação, com genes de resistência a antibióticos. O uso de cobre em suiniculturas poderá favorecer a manutenção de bactérias multiresistentes ou a transferência horizontal de elementos genéticos móveis portadores de genes que codificam resistência aos antibióticos e/ou biocidas. In the last decades, the emergence of multiresistant bacteria associated to the massive use of antibiotics has been defying the public health, since scarce therapeutic alternatives remain available to treat human infections. Recently, it was suggested that biocides (e.g.copper, mercury, quaternary ammonium compounds) widely used in several ecological niches, could contribute to the selection and maintenance of multiresistant bacteria. This phenomenon might occur through the horizontal transfer of mobile genetic elements carrying genes that confer resistance to antibiotics and tolerance to biocides or by the share of common resistance mechanisms responsible for cross resistance to both types of compounds. Therefore, knowing that high amounts of copper sulphate are used as swine growth promotor and copper and mercury resistance genes are associated to mobile genetic elements, the goals of this study were to evaluate in bacteria from Portuguese piggeries: a) the frequency of tcrB (resistance to copper) and merA (mercury resistance) genes; and b) their ability to transfer to other bacteria along with antibiotic resistance. It was included 199 Enterococcus spp belonging to different species and isolated from six Portuguese pig farms located throughout the country. tcrB gene was detected in 27% of Enterococcus spp, by PCR method. Of these, 59% belonged to E.faecium suggesting that this specie might be more prone to a acquire tcrB. Contrary, merA gene was not amplified in any isolate. By agar dilution method adapted from CLSI standards, tcrB+ Enterococcus spp presented CMI ≥ 16 mM. Variable values of CMI (8-28 mM) were detected among tcrB- isolates. Mating assays revealed that tcrB was often transferred when tetracycline or erythromycin were used as selective pressure agents. The resistance to these antibiotics in tcrB+ transconjugants was also the more predominant. In conclusion, Portuguese piggeries are reservoirs of tcrB, often co-transferred with genes coding for resistance to antibiotics. The use of copper as animal growth promoter might help to maintain antibiotic resistant bacteria in the animal environment and promote horizontal transfer of mobile genetic elements carrying genes that encoding antibiotic resistance and / or biocides.
- Estudo do efeito protector da folha e fruto da espécie Arbutus unedo L. na danificação oxidativa em eritrócitos humanosPublication . Mendes, Lídia Isaura Sousa; Carvalho, MárciaO Arbutus unedo L., vulgarmente designado por medronheiro, é uma planta endémica da região Mediterrânica amplamente utilizada na alimentação e na medicina tradicional devido às suas actividades biológicas. Estudos fitoquímicos realizados nesta espécie evidenciaram que os extractos da folha e fruto contêm diversos antioxidantes naturais. As folhas apresentam na sua constituição compostos fenólicos, tais como taninos, flavonóides e glicosídeos fenólicos e α-tocoferol, enquanto os frutos possuem também variados compostos fenólicos (antocianinas, derivados do ácido gálhico, taninos e flavonóides), vitamina C e E e carotenos. Assim, é de prever que a espécie Arbutus unedo L. tenha um considerável potencial antioxidante. No entanto, as propriedades antioxidantes desta espécie em membranas biológicas não foram até então avaliadas. Por esta razão, o presente trabalho deteve-se na avaliação do efeito protector dos extractos aquosos da folha e fruto de Arbutus unedo L. na danificação oxidativa induzida por radicais livres, utilizando como modelo celular in vitro o eritrócito humano. O 2,2´-azo-bis(2-amidinopropano) (AAPH) é um sistema gerador de radicais livres peroxilo no meio extracelular que atacam a membrana eritrocitária causando várias alterações oxidativas, as quais foram avaliadas neste estudo pela libertação de hemoglobina (hemólise) e pela peroxidação dos lípidos da membrana dos eritrócitos. Os ensaios realizados mostram uma actividade antioxidante para o extracto da folha superior à do fruto. Ambos os extractos protegeram a membrana do eritrócito da hemólise induzida pelo AAPH, de forma dependente do tempo e da concentração, obtendo-se valores de IC50 de 0,062 ± 0,002 mg/mL para as folhas e 0,377 ± 0,047 mg/mL para os frutos. Além disso, os eritrócitos humanos tratados com os extractos de Arbutus unedo L. apresentaram uma diminuição, dependente da concentração, dos níveis de malonildialdeído que é um produto de decomposição da peroxidação lipídica. Os resultados indicam que a espécie Arbutus unedo L., especialmente a folha, constitui uma fonte promissora de antioxidantes naturais com potencial aplicação na prevenção e/ou terapêutica de doenças nas quais os radicais livres estão implicados. The Arbutus unedo L., usually known as strawberry tree, is a Mediterranean endemic plant widely employed as food and in traditional medicine owed to its biological activities. Phytochemical studies evidenced that this species leaf and fruit contains various natural antioxidants. Several phenolic compounds are present in leaves such as tannins, flavonoids, phenolic glycosides and α-tocopherol, while the fruit also possess a variety of fenolic compounds (anthocyanins, galic acid derivatives, tannins and flavonoids), vitamins C and E, and carotenoids. Based on their chemical composition, it is reasonable to expect a high antioxidant activity for Arbutus unedo L. fruit and leaf extracts. However, the antioxidant properties of this species in biological membranes have not been evaluated thus far. Therefore, the current study focused on the evaluation of the protective effect of the aqueous extracts obtained from leaves and fruits of Arbutus unedo L. against the oxidative damage induced by free radicals using the human erythrocyte as in vitro cellbased model assay. The 2,2’-azo-bis(2-amidinopropane) (AAPH) was applied due to its properties as a free radical initiator to generate peroxyl radicals in the aqueous phase which can attack the erythrocyte membrane to induce lipid peroxidation. Oxidative injury was assessed by release of hemoglobin (hemolysis) and peroxidation of the erythrocyte membrane lipids. This study showed stronger inhibitory efficiency for the leaf extract in comparison to the fruit. Both extracts protected the erythrocyte membrane from hemolysis in a timeand concentration-dependent manner, with IC50 values of 0.062 ± 0.002 and 0.377 ± 0.047 mg/mL for leaf and fruit extracts, respectively. Moreover, human erythrocytes treated with Arbutus unedo L. extracts showed concentration-dependent decrease in levels of malondialdehyde, a breakdown product of lipid peroxidation. In conclusion, these results suggest Arbutus unedo L. species, mainly its leaf, as a promising source of natural antioxidants with potential use in the prevention and/or treatment of diseases mediated by free radicals.
- Determinação do teor de sódio em cereais de pequeno-almoço por espectrofotometria de emissão com atomização em chamaPublication . Freixo, Susana Braga; Souto, Renata; Pimenta, AdrianaO ritmo acelerado da vida moderna e o aumento do número de pessoas a viverem sozinhas determinaram grandes mudanças nos seus hábitos alimentares (Černohorský et al., 2008). Cada vez existe menos tempo disponível para a confecção de refeições, o que, em parte, contribuiu para o rápido progresso da tecnologia dos alimentos industrializados, entre os quais os cereais de pequeno-almoço (Krejčová et al., 2007). Contudo, apesar da praticidade que trouxeram, muitos alimentos industrializados têm um elevado teor em sal (Food Standards Agency, 2003). Vários estudos têm sugerido que a ingestão excessiva de sódio, na forma de sal, contribui para o desenvolvimento de diversas patologias, tais como a hipertensão arterial, apesar de ainda permanecer por determinar quais os mecanismos de acção que os desencadeiam (Polónia et al., 2006). Por essa razão, a Organização Mundial de Saúde (OMS) recomenda que a ingestão diária de sal em adultos não exceda 5 gramas (OMS, 2003). Os cereais de pequeno-almoço foram desenvolvidos nos finais do século XIX na América e introduzidos na Europa no início do século XX (McKevith, 2004). Desde aí verificou-se uma intensa popularização destes alimentos devido à sua facilidade de preparação e ao facto de se tratarem de boas fontes de energia e nutrientes (Villanueva et al., 2000). Em Portugal a adesão a estes alimentos foi notória, tendo-se tornado em 2000/2001 no segundo país da União Europeia com maior consumo per capita de cereais, atingindo um valor de 129,4 kg/habitante/ano (Instituto Nacional de Estatística, 2003). Apesar dos cereais de pequeno-almoço não terem propriamente um elevado teor em sal (cada porção de 30 g de cereais corresponde, em média, a 2,6% da dose diária recomendada de sódio para um adulto e a 10,6% para uma criança entre os 7 aos 10 anos), a popularização destes alimentos e a frequência com que são consumidos, principalmente pelas crianças, torna interessante o seu controlo e a quantificação, de modo a verificar qual o impacto deste tipo de alimentos na dose diária de sal. Este trabalho teve como objectivo a determinação do teor em sódio em cereais de pequeno-almoço e a respectiva análise do seu contributo para a dose diária de sal recomendada O método seleccionado para a determinação do teor sódio em cereais de pequeno-almoço baseia-se na espectroscopia de emissão com atomização em chama. Procedeu-se à avaliação das características de desempenho desta metodologia, apresentando um intervalo de linearidade compreendido entre 0,05-2 mg/L e um limite de detecção de 0,002 mg/L. A precisão dos resultados revelou-se adequada tendo sido obtidos valores de desvio padrão relativos inferiores a 7% em ensaios de repetibilidade e 9% em estudos de precisão intermédia. Fez-se, igualmente, um estudo da possível interferência de elementos presentes nestas amostras (potássio, cálcio e magnésio), do qual se concluiu que nenhum dos minerais analisados interfere significativamente nas determinações do sódio, para as concentrações testadas. O método desenvolvido foi aplicado à determinação de sódio em doze amostras de cereais de pequeno-almoço. A exactidão dos resultados foi também avaliada não tendo sido observadas diferenças estatisticamente significativas entre os resultados obtidos e os esperados. Verificou-se que os níveis de sódio são muito distintos de amostra para amostra, tendo variado entre 0,1 e 0,9 g Na/100 g cereal. Daqui se pode concluir que há cereais que contribuem mais significativamente do que outros para a dose diária recomendada, havendo alguns cujo impacto é significativo e outros em que é quase desprezável. Assim sendo, o consumidor deve estar ciente da existência destas diferenças de modo a tomar uma escolha mais adequada e sensata destes alimentos face ao seu estado de saúde, idade e frequência de consumo pretendida. The fast rithm of modern life and increasing the number of people living alone brought about dramatic changes in their eating habits (Černohorský et al., 2008). The time available to prepare meals is progressively smaller, contributing to the fast development of food technology, including breakfast cereals (Krejčová et al., 2007). However, despite their convenience, many processed foods have a high salt content (Food Standards Agency, 2003). Several studies have suggested that excessive intake of sodium, in the form of salt, contributes to the development of a number of diseases (such as hypertension) although the mechanisms of action that the trigger them, remain to be determined (Polónia et al., 2006). For this reason, the World Health Organization suggests that the daily intake of salt by adults does not exceed 5 grams (OMS, 2003). The breakfast cereals were developed in the late XIX century in America and introduced in Europe in the early XX century (McKevith, 2004). Since then, its use has become popular due to the ease of preparation and the fact that they are good sources of energy and nutrients (Villanueva et al., 2000). In Portugal, the increase in the consumption of these products was evident, reaching a value of 129.4 kg / capita / year (Instituto Nacional de Estatística, 2003) in 2000/2001, which puts us in the place of second European Union country with highest per capita consumption breakfast cereals. Although breakfast cereals are not considered foods with a high salt content (each 100 g portion corresponds, on average, to 8% of the daily recommended sodium for an adult and 33% for a children between 7 to 10 years), the popularity of these products and the frequency with which they are consumed, especially by children, make it important to monitor and quantify their sodium content, in order to assess the their contribution to the daily dose of salt. The aim of this study was to determine the sodium content in several samples of breakfast cereals and estimate their contribution to the daily dose of salt.The methodology used was based on atomic emission spectroscopy with flame atomization. The procedure had a linear range between 0.05 to 2 mg/L and a detection limit of 0.002 mg/L. Precision of the results proved to be adequate - relative standard deviation lower than 7% and 9 were obtained in repeatability trials and intermediate precision studies, respectively. Studies of the possible influence of other elements present in cereals (potassium, calcium and magnesium) on the analytical signal, were also performed. At the concentration levels tested, none of the analyzed minerals significantly interferes. The method was successfully applied to the determination of sodium in twelve samples of breakfast cereals. Accurate results were obtained since there was no evidence of statistical differences amongst the results achieved and those expected (provided by the manufacturer). Sodium levels ranging from 0.1 to 0.9 g Na/100g cereal were found in diverse samples, giving evidence of significant differences on their sodium content. Therefore, the contribution of such products to the recommended daily dose salt will be markedly different with some where the impact is significant and others where it is almost negligible. Consumers should be aware of such a difference in order to make appropriate choices according to their health, age and frequency of consumption of breakfast cereals.
- Ginseng (Panax ginseng): mito ou verdade científica?Publication . Fernandes, Ana Verina Faria; Silva, Branca; Carvalho, MárciaO ginseng (Panax ginseng) é uma espécie botânica utilizada há milhares de anos pela Medicina tradicional chinesa para aumentar a longevidade e melhorar a qualidade de vida. A planta medicinal (fármaco) é constituída pelas raízes secas (inteiras ou fragmentadas) de plantas com 4 a 6 anos de idade, quando o seu teor global de ginsenósidos (saponósidos triterpénicos tetracíclicos poli-hidroxilados) - a principal classe de compostos bioactivos do ginseng - atinge a concentração máxima. Estudos científicos parecem indicar que o ginseng aumenta a capacidade de resistência às doenças, à fadiga e ao stress. Estão ainda descritas as suas actividades antiviral, antiagregante e antioxidante e de tónico cardíaco. As acções manifestadas por esta planta medicinal originaram a criação de um novo grupo de fármacos denominados de adaptogénios. Estes produtos são caracterizados por serem capazes de normalizar lentamente o organismo, quando este se encontra sob stress ou com as resistências naturais diminuídas por infecções, ou mesmo quando haja perda de vitalidade física e intelectual por efeito do envelhecimento. Contudo, é de referir que o uso continuado deste fármaco pode originar a “síndrome de abuso do ginseng”, com efeitos idênticos aos causados pelo emprego de corticosteróides tais como nervosismo, insónia, hipertensão arterial, urticária e diarreia matinal. Este trabalho pretende rever a literatura científica disponível no que concerne aos estudos científicos já realizados ao ginseng, em particular os relacionados com os seus ginsenósidos e respectivas actividades biológicas. Ginseng (Panax ginseng) is a botanical species used for thousands of years by traditional Chinese medicine to increase longevity and improve life quality. The medicinal plant (drug) is constituted by the dry roots (whole or in fragments) from 4 to 6 years old plants. At that age, their overall content of ginsenosides (polyhydroxylated tetracyclic triterpenoid saponins) - the main class of bioactive compounds in ginseng - reaches its maximum. Scientific studies seem to indicate that ginseng increases the resilience to disease, fatigue and stress. Other activities reported are antiviral, antiaggregant, antioxidant and cardiotonic. The actions expressed by this medicinal plant originated the creation of a new group of drugs named adaptogens. These drugs can slowly rebalance the human body when stressed or with a diminished resistance due to infections. They can also be used when physical or intellectual vitality is somewhat decreased due to aging. However, the prolonged use of this drug can lead to “ginseng abuse syndrome”, causing identical effects to those observed with the use of corticosteroids including nervousness, insomnia, hypertension, skin eruptions and morning diarrhea. This paper aims to review the available scientific literature regarding the studies already conducted with ginseng, especially ones associated to its ginsenosides and their corresponding biological activities.