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Estudo da suscetibilidade aos antibiĆ³ticos em isolados de Enterobacteriaceae provenientes de suiniculturas Portuguesas
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Authors
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Abstract(s)
O reconhecimento da resistĆŖncia antimicrobiana como um fenĆ³meno emergente
em saĆŗde pĆŗblica, tem constituĆdo um problema a nĆvel mundial. A comunidade
cientĆfica constatou a necessidade de realizar a avaliaĆ§Ć£o da suscetibilidade aos
antibiĆ³ticos em ābactĆ©rias indicadorasā de diversas origens, como uma medida para
combater o aumento da resistĆŖncia antimicrobiana. As bactĆ©rias comensais Escherichia
coli sĆ£o colonizadoras do trato gastrintestinal da maioria dos animais e humanos
permitindo realizar estudos de emergĆŖncia, ocorrĆŖncia e disseminaĆ§Ć£o da resistĆŖncia aos
antibiĆ³ticos. Em Portugal, a maioria dos estudos centra-se na pesquisa de ESBLs em
Enterobacteriaceae provenientes das fezes de animais para consumo humano, existindo
poucos estudos desenvolvidos sobre a avaliaĆ§Ć£o dos perfis de suscetibilidade em
Enterobacteriaceae provenientes de diferentes tipos de amostras de suiniculturas
(raƧƵes, animais, Ć”guas, esgotos), assim como sobre a ocorrĆŖncia de ESBLs e a anĆ”lise
da estrutura populacional de Enterobacteriaceae neste nicho. O presente estudo tem
como objetivos: (i) testar a suscetibilidade a vĆ”rios antibiĆ³ticos em Enterobacteriaceae
provenientes de suĆnos e de diversos ambientes de suiniculturas Portuguesas, (ii) detetar
a ocorrĆŖncia de Enterobacteriaceae produtoras de ESBLs em suiniculturas Portuguesas
e (iii) analisar a estrutura populacional de Escherichia coli provenientes de suĆnos e de
diversos ambientes de suiniculturas Portuguesas. Foram analisadas amostras
provenientes de cinco suiniculturas Portuguesas distribuĆdas pela regiĆ£o Norte, Centro e
Sul do paĆs. ApĆ³s prĆ©-enriquecimento, as amostras foram inoculadas em meios de agar
MacConkey com ou sem antibiĆ³ticos. Os diferentes morfotipos foram identificados
presuntivamente atravĆ©s da realizaĆ§Ć£o da coloraĆ§Ć£o de Gram, teste de oxidase e
fermentaĆ§Ć£o da glucose e tambĆ©m por tĆ©cnicas de biologia molecular, nomeadamente
PCR. Foi feito o estudo da estrutura populacional de E. coli pela determinaĆ§Ć£o dos
grupos filogenĆ©ticos e testada a suscetibilidade a vinte e trĆŖs antibiĆ³ticos utilizando o
mĆ©todo de difusĆ£o em agar. A deteĆ§Ć£o da produĆ§Ć£o de beta-lactamases de espetro
alargado foi efetuada atravƩs do teste do duplo sinergismo (DDST). De um modo geral,
os grupos filogenĆ©ticos com maior frequĆŖncia foram o A1 (54%, 59/110), o A0 (22%,
24/110) e o B1 (21%, 23/110). Os grupos com menor frequĆŖncia foram o D1 (3%,
3/110) e o D2 (1%, 1/110). Relativamente ao grupo B2 nĆ£o se verificou a presenƧa de
isolados pertencentes a este grupo. Os antibiĆ³ticos nĆ£o beta-lactĆ¢micos para os quais se observou uma maior frequĆŖncia de resistĆŖncia foram as tetraciclinas (84%, 146/174), a
estreptomicina (75%, 130/174), as sulfonamidas (73%,127/174), o trimetoprim (72%,
125/174), e a espectinomicina (56%, 98/174). Entre os antibiĆ³ticos beta-lactĆ¢micos a
maior taxa de resistĆŖncia foi observada para a amoxicilina e Ć”cido clavulĆ¢nico (16%,
28/174) cefotaxima (15%, 26/174) e a cefoxitina (13%, 23/174). Detetou-se a produĆ§Ć£o
de beta-lactamases de espectro alargado em 14% (25/174) dos isolados testados.A
elevada ocorrĆŖncia de resistĆŖncia a antibiĆ³ticos nas Enterobacteriaceae testadas Ć©
preocupante, uma vez que bactĆ©rias resistentes a antibiĆ³ticos e/ou os seus genes de
resistĆŖncia poder-se-Ć£o disseminar no ambiente ou atingir o Homem atravĆ©s da cadeia
alimentar, constituindo uma importante ameaƧa para a saĆŗde pĆŗblica. Recognition of antimicrobial resistance as an emerging phenomenon in public
health has been a worldwide problem. The scientific community has found the need for
assessing susceptibility to antibiotics in "indicator bacteria" from various sources as a
measure to combat increasing antimicrobial resistance. Commensal Escherichia coli
bacteria colonize the gastrointestinal tract of most animals and human, allowing the
study of the emergency, occurrence and spread of antibiotic resistance. In Portugal,
most studies focuses on the research of ESBLs in Enterobacteriaceae from the feces of
animals for human consumption. However, there are only few studies conducted on the
evaluation of susceptibility profiles in Enterobacteriaceae from different types of
samples of pig farms (feed, animals, water, sewage), on the occurrence of ESBLs and
on the analysis of the population structure of this niche. The present study aims to: (i)
test the susceptibility to various antibiotics in Enterobacteriaceae, from pigs and pig
farms from Portuguese diverse environments, (ii) detect the occurrence of ESBLproducing
Enterobacteriaceae in Portuguese pig farms and (iii) analyze the structure of
the population of Escherichia coli from pigs and pig farms from Portuguese diverse
environments. We analyzed samples from five Portuguese pig farms distributed by the
North, Centre and South. After pre-enrichment, samples were inoculated onto
MacConkey agar media with or without antibiotics. The different morphotypes were
presumptively identified by performing Gram staining, oxidase test and glucose
fermentation and also by molecular biology techniques, including PCR. The study of the population structure of E. coli was made by determining the phylogenetic groups
and the susceptibility to twenty three antibiotics was tested using the agar diffusion
method. Detection of beta- lactamases production of extended spectrum was performed
by testing the double synergism (DDST). In general, the most frequent phylogenetic
groups were A1 (54%, 59 /110), A0 (22%, 24 /110) and B1 (21%, 23 /110). Otherwise,
the less frequent groups were D1 (3%, 3/ 110) and D2 (1%, 1 /110). There was no
evidence of the presence of strains belonging to the group B2. The non-beta-lactam
antibiotics for which we observed a higher frequency of resistance were tetracycline
(84%, 146/174), streptomycin (75%, 130/174), sulfonamides (73%, 127/174)
trimethoprim (72%, 125/ 174) and spectinomycin (56%, 98 /174). Among the betalactam
antibiotics the highest rate of resistance was observed for amoxicillin and
clavulanic acid (16%, 28/174) cefotaxime (15%, 26/174) and cefoxitin (13%, 23/174).
The production of broad sprectrum beta- lactamase was verified in 14% (25 /174) of the
isolates tested. The high incidence of antibiotic resistance in the tested
Enterobacteriaceae is worrying, since antibiotic resistant bacteria and/or their resistance
genes will be able to spread in the environment or achieving man through the food
chain, constituting a major threat to public health.
Description
Projeto de PĆ³s-GraduaĆ§Ć£o/DissertaĆ§Ć£o apresentado Ć Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenĆ§Ć£o do grau de Mestre em CiĆŖncias FarmacĆŖuticas