Utilize este identificador para referenciar este registo: http://hdl.handle.net/10284/2270
Título: Resistência adquirida a quinolonas em Enterobacteriaceae isoladas de suiniculturas Portuguesas
Autor: Monteiro, Ana Raquel Pinto
Orientador: Machado, Elisabete
Data de Defesa: 2011
Editora: [s.n.]
Resumo: As Enterobacteriaceae são indubitavelmente uma importante família bacteriana, ampla e versátil, que constitui a causa de sérias infecções, quer em animais, quer no Homem. O tratamento de infecções causadas por Enterobacteriaceae é efectuado recorrendo a antibióticos, encontrando-se os β-lactâmicos e as quinolonas entre as opções terapêuticas de primeira linha. Todavia, o seu uso exacerbado, quer em medicina humana, quer em medicina veterinária, tem levado à emergência e disseminação de mecanismos de resistência. A resistência a quinolonas em Enterobacteriaceae era habitualmente interpretada como cromóssomica. A descoberta recente de mecanismos de resistência a quinolonas mediados por plasmídeos (RQMP) veio acrescentar uma nova dimensão ao problema da resistência a esta classe de antibióticos. Estes mecanismos conduzem habitualmente a uma diminuição da susceptibilidade a quinolonas, mas parecem facilitar a selecção de mutantes com alto nível de resistência. A identificação de genes que conferem resistência a quinolonas localizados em plasmídeos tem aumentado por todo o mundo, tanto em Enterobacteriaceae de origem humana, como de origem animal. O trabalho que aqui se apresenta tem como objectivo investigar a ocorrência e a diversidade de genes que codificam para a resistência adquirida a quinolonas em Enterobacteriaceae provenientes de suiniculturas Portuguesas. Para tal, foram analisados 173 isolados de Enterobacteriaceae representativos de diferentes morfotipos/perfis de susceptibilidade, os quais foram obtidos de quarenta e três amostras provenientes de cinco suiniculturas Portuguesas de diferentes regiões geográficas (2006-2007). A pesquisa de genes que codificam para RQMP foi efectuada através da amplificação de ácidos nucleicos pela técnica de PCR, usando primers e condições de amplificação para a detecção de genes que codificam para proteínas Qnr (qnrA, qnrB, qnrS), para a enzima AAC(6’)-Ib-cr [aac(6´)-Ib-cr] e para bombas de efluxo de quinolonas (qepA). Os genes amplificados foram sequenciados e as sequências nucleotídicas obtidas comparadas com as depositadas em bancos de dados genéticos mundiais. Foi observada uma baixa prevalência de resistência ao ácido nalidíxico (17%) e à ciprofloxacina (2%). A ocorrência de genes de resistência a quinolonas mediada por plasmídeos foi de 3% (5/173) entre os isolados analisados (4 suiniculturas; Norte, Centro e Sul). O gene qnrB foi o mais frequente, tendo sido detectado em 4 isolados de Citrobacter freundii provenientes de amostras de pó (n=2), ração dos suínos (n=2) e água limpa do exterior da pocilga (n=1) de 3 suiniculturas (Norte, Centro e Sul). O gene qnrS foi encontrado apenas em um isolado de E. coli produtor da beta-lactamase de espectro alargado CTX-M-32. Os genes qnrA, qepA e aac(6´)-Ib-cr não foram detectados em nenhum isolado. Este estudo constitui a primeira descrição de genes qnr em Enterobacteriaceae provenientes de suínos ou do ambiente de produção animal (suiniculturas) em Portugal. Os resultados obtidos indicam que as suiniculturas poderão constituir um reservatório importante de genes que codificam para resistência a quinolonas mediada por plasmídeos. O papel de C. freudii como um reservatório relevante de genes qnr é também confirmado. Enterobacteriaceae are undoubtedly an important bacterial family, large and versatile, causing serious infectious diseases both in animals and humans. Treatment of infections caused by Enterobacteriaceae is done using antibiotics, being β-lactams and quinolones among the first-line treatment options. However, overuse of these molecules in human and veterinary medicine has led to the emergence and spread of antibiotic resistance mechanisms. Resistance to quinolones in Enterobacteriaceae was usually interpreted as chromosomal. The recent discovery of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) Resistência adquirida a quinolonas em Enterobacteriaceae isoladas de suiniculturas Portuguesas viii mechanisms added a new dimension to the problem of resistance to this class of antibiotics. These mechanisms typically lead to a decreased susceptibility to quinolones, but seem to facilitate the selection of high-level resistance mutants. The identification of plasmid-mediated quinolone resistance genes has increased worldwide in Enterobacteriaceae of human and animal origin. The work presented here aims to investigate the occurrence and diversity of genes coding for acquired resistance to quinolones in Enterobacteriaceae from Portuguese piggeries. To accomplish these goals, a total of 173 Enterobacteriaceae representing different morphotypes/susceptibility patterns were analysed. Isolates were obtained from forty-three samples collected at five piggeries located at different geographic regions of Portugal (2006- 2007). Genes coding for PMQR were searched by PCR, using primers and conditions for detection of qnrA, qnrB, qnrS, aac(6')-Ib-cr and qepA genes. PCR products were sequenced and the sequences obtained were compared with those deposited in worldwide genetic databases. A low rate of resistance to naladixic acid (17%) and ciprofloxacin (2%) was observed. The occurrence of PMQR genes was 3% (5/173) among the isolates analyzed (4 piggeries; North, Centre and South). qnrB was the most frequent gene, being detected in four isolates of Citrobacter freundii from samples of powder (n=2), feed (n=2) and clean water outside the pigsty (n=1) from 3 piggeries (North, Centre and South). qnrS was only found in one E. coli isolate producing the extended-spectrum beta-lactamase CTX-M-32. qnrA, qepA and aac(6')-Ib-cr were not found. This study constitutes the first report of qnr genes in Enterobacteriaceae from pigs or from the animal production environment (piggeries) in Portugal. The results indicate that piggeries may constitute an important reservoir of genes that code for PMQR. The role of C. freudii as a relevant reservoir of qnr genes is also confirmed.
Descrição: Monografia apresentada à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Licenciada em Ciências Farmacêuticas.
URI: http://hdl.handle.net/10284/2270
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